ライトシート顕微鏡のすばらしい説明
米国バージニア州アッシュバーンにあるハワード ヒューズ メディカル インスティチュートのジャネリア リサーチ キャンパスに所属する Philip J. Kellerとその研究チームは,大型の生体試料を高い時間的 空間的分解能でイメージングすることを目標の一つとしている. この目的のために、Keller氏と同僚のRaghav K. Chhetri氏は、 サンプルを4方向から同時に、高速かつ高空間分解能で撮影できる光シート顕微鏡を開発しました。
"IsoView"と呼ばれるライトシート顕微鏡の心臓部には、互いに直交するように配置された4本の同一アーム(光路)があり、それぞれが同時にサンプルを照射し、放出された蛍光光を画像化することができます。励起と検出間のクロストークをできるだけ小さくするために、光路は時間的、空間的、またはスペクトル的に互いに分離されています。そして、生成された4つの画像を合成することで、すべての次元で高解像度で、ほぼ等方的な画像を得ることができます。そのために、Keller氏とそのチームは、Lucy-Richardsonの3次元マルチビューデコンボリューションアルゴリズムの独自の実装を作成した。この方法では、合成画像の高い空間分解能に加えて、高い時間分解能も得られるため、試料の変化を経時的に記録することができます。
対物レンズの移動や試料の位置決めができるコンパクトなリニアと回転ステージ
4つの対物レンズを動かすためのモーションシステムは、顕微鏡の構造上、非常に重要です。この目的のために、対物レンズごとに300µmの移動量(あるいは900µm)を持つ非常にコンパクトなPIHera P-622.1型精密ポジショナーが使用され、それぞれがE-709.CHG型コントローラーによって制御されています。
PIHera P-622.1CD型精密ポジショナーは、オールセラミック製のPICMA®ピエゾアクチュエーターをベースにしており、その動きは、遊びのないフレクシャーガイドによって伝えられます。移動範囲(クローズドループ)は250μm、繰り返し精度は±1ナノメートルです。動作量は、ドライブやガイドの影響を受けずに、モーションプラットフォームでダイレクトに測定されます。
4つの対物レンズを動かすためのモーションシステムは、顕微鏡の構造上非常に重要である。優れた直線性の動き、長期安定性、帯域幅(kHz)を保証します。
積み重ねた3台のM-111 リニアステージは、M-116.2DG 回転ステージと結合され、IsoView顕微鏡にてサンプルを動かすのに使用されます これらは、C-884.4DC DCモーターコントローラで制御されます。